método del didesoxi

método del didesoxi

(dideoxy method) Biol. Fund. Procedimiento para determinar la secuencia nucleotídica del DNA, en el que los 2',3'-didesoxi-análogos de los desoxinucleósido trifosfatos normales se usan como inhibidores de la DNA polimerasa. Implica la utilización de la cadena, cuya secuencia se quiere determinar, como molde para la síntesis de una nueva cadena de DNA. Esta síntesis se realiza por medio de la DNA polimerasa I en presencia de un cebador y de la mezcla de un didesoxinucleosido trifosfato y los cuatro nucleósido trifosfatos normales, uno de los cuales está marcado con isótopos radiactivos o sondas fluorescentes. El proceso de síntesis se detiene aleatoriamente en cualquiera de las posiciones ocupadas por una base, cuando se incorpora el correspondiente didesoxi-análogo. Se llevan a cabo independientemente reacciones análogas con cada uno de los diferentes 2',3'-didesoxi-derivados. De este modo, todos los fragmentos obtenidos en presencia de un determinado didesoxi-análogo terminan en la base correspondiente y el conocimiento de sus tamaños permite situar esas bases en la secuencia. Los fragmentos resultantes se separan por electroforesis en gel para determinar sus tamaños, y su migración se detecta por autorradiografía o por medidas de fluorescencia. Es la base de los métodos actuales de secuenciación automática de DNA. Sinóns.: método de Sanger, método de terminación de la cadena.